Mismo formato de un ensayo ELISA.
Mayor sensibilidad y rango dinámico.
La tecnología FRET proporciona una medición ratiométrica y elimina la necesidad de lavados.
Requerimientos exigentes para trabajar con matrices complejas y un excelente rango dinámico
Mismo formato de un ensayo de ELISA. Mayor sensibilidad y rango dinámico.
El protocolo de DELFIA® es muy similar al de una prueba de ELISA convencional. El anticuerpo es capturado en una microplaca, seguido de la adición de la muestra y, posteriormente, del anticuerpo de detección, lo que representa un ensayo sándwich típico.
Sin embargo, a diferencia de la prueba de ELISA que utiliza a la enzima peroxidasa para generar una reacción colorimétrica medible, DELFIA® utiliza lantánidos de europio cuya señal de fluorescencia es mucho más estable e intensa. Además, debido a su naturaleza no enzimática, no es susceptible a la degradación.
Este elemento es liberado del complejo analito-anticuerpo una vez se añade “DELFIA® Enhancement Solution” o “DELFIA® inducer” a la reacción, incrementando la intensidad de fluorescencia del nuevo lantánido generado, de 1 a 10 millones de veces.
Transferencia de Energía por Resonancia de Föster (FRET)
La transferencia de energía por resonancia de Föster (FRET) consiste en transferir energía de una molécula donante (un fluoróforo) a una molécula aceptora fluorescente, la cual ocurre únicamente si ambas moléculas están en cercanía de 1 a 10 nanómetros. La molécula donadora es excitada por una fuente de luz con una longitud de onda específica, y emite energía de fluorescencia en una longitud de onda más amplia (menor energía).
Para que esta energía no sea liberada al medio y sea absorbida, el espectro de emisión de la molécula donadora y el espectro de excitación de la molécula aceptora deben traslaparse. De esta manera, la molécula aceptora es excitada y emite una señal fluorescente que es medida finalmente por el equipo.
La técnica FRET se utiliza en investigación para estudiar las interacciones moleculares, la localización o concentración de proteínas y otros fenómenos que implican cambios en la proximidad molecular dentro de las células vivas.
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